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???metadata.dc.type???: Dissertação
Title: Caracterização e perfil fenogenotípico de virulência de Vibrio alginolyticus associados aos mexilhões Perna perna (LINNAEUS, 1758) previamente isolados em diferentes pontos da costa do Rio de Janeiro
Other Titles: Characterization and phenogenotipic profile of Vibrio alginolyticus virulence associated with mussels Perna perna (LINNAEUS, 1758) in different parts of the Rio de Janeiro coast
???metadata.dc.creator???: ALMEIDA, Greiciane França Bronzato de 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Souza, Miliane Moreira Soares de
First advisor-co: Coelho, Shana de Mattos de Oliveira
???metadata.dc.contributor.referee1???: Souza, Miliane Moreira Soares de
???metadata.dc.contributor.referee2???: Rodrigues, Dália dos Prazeres
???metadata.dc.contributor.referee3???: Araujo, Fábio Vieira de
???metadata.dc.description.resumo???: A mitilicultura é o ramo da aquicultura que mais tem se expandido mundialmente. O mexilhão Perna perna tem sido considerado o organismo de maior relevância econômica nesse contexto, porém a contaminação microbiológica de seus tecidos desses animais pode inviabilizar seu consumo. Vibrio alginolyticus pode ser destacado entre os micro-organismos associados a quadros de infecção em animais marinhos como patógeno oportunista causador de vibriose em peixes, crustáceos e moluscos. O presente trabalho objetivou identificar V. alginolyticus associados a mexilhões Perna perna, bem como avaliar o perfil fenogenotípico da virulência deste microrganismo, em amostras coletadas em diferentes pontos da costa do Rio de Janeiro. Foram obtidos 49 isolados. Após a análise fenotípica, os isolados foram submetidos as técnicas de detecção do gene pyrH por Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e MALDI-TOF MS (Espectrometria de Massa por Tempo de Vôo de Ionização/Desorção por Laser Assistida por Matriz). Todos os isolados testados amplificaram o gene pyrH. O sequenciamento do fragmento de 541pb deste gene é utilizado para diferenciação de espécies de Vibrio. Através do MALDI-TOF MS, confirmou-se 43 isolados como V. alginolyticus (87,8%), 4 isolados como Shewanella putrefaciens (8,2%) e apenas 1 foi identificado como V. parahaemolyticus (2%). Apenas um isolado não foi identificado pela técnica (2%). Após o resultado do MALDI-TOF, oito produtos de amplificação do gene pyrH representativos de diferentes perfis foram enviados para sequenciamento. Para a análise fenotípica da produção de colagenase, um marcador de virulência de V. alginolyticus, foi realizado o teste da hidrólise da gelatina. Todos isolados de V. alginolyticus e S.putrefaciens foram positivos. Além disso, os genes collagenase, ompK e toxR foram utilizados para avaliar a virulência genotípicamente das espécies estudadas. Dos 49 isolados estudados, os 47 isolados positivos a prova fenotípica amplificaram o gene collagenase. A expressão do gene ompK pode ser observada em 46,9% (23/49) dos isolados sendo 91,3% (n = 21) de V. alginolyticus e 4,3% (n = 1) de V. parahameolyticus e S. putrefaciens, respectivamente. Sete isolados (14,3%) produziram bandas para amplificação do gene toxR, sendo todos caracterizados como V. alginolyticus. Os testes fenotípicos realizados demonstraram correlação significante na identificação de V. alginolyticus quando comparados com os resultados genotípicos e de proteômica.
Abstract: Mytiliculture is the most globally expanded branch of the aquaculture practice. The mussel Perna perna has been considered the most economically relevant species. However, microbiological contamination of their tissues can turn them unsuitable for human consumption. Vibrio alginolyticus can be noticed among the microrganisms associated to marine animal diseases as an oportunistic pathogen for fish, crustaceans and mussels. The present study aimed to identify V. alginolyticus associated with mussels (Perna perna) and to assess the pheno-genotypic virulence profile of this microorganism in samples from different locations of the Rio de Janeiro coast. A total of 49 isolates were obtained. After phenotypic analysis, the isolates were subjected techniques for detection of pyrH gene by polymerase chain reaction (PCR) and MALDI-TOF MS (matrix assisted laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry) techniques. All 49 isolates tested positive for pyrH gene. Sequencing of the 541pb amplicon is used to differentiate Vibrio species. MALDI- TOF MS confirmed 43 isolates as V. alginolyticus (87,8%), four were identified as Shewanella putrefaciens (8,2%), only one was identified as V. parahaemolyticus (2%). Just one isolate was not identified by this technique (2%). After MALDI-TOF analysis, eight amplicons of pyrH gene of distinct profiles were sento to sequencing. The phenotypic evaluation of collagenase production, a virulence marker of V. alginolyticus was assayed using the gelatin hydrolysis test. All V. alginolyticus and S. putrefaciens were positive. Additionally, collagenase, ompK and toxR genes were used to genotypically assess the virulence of the V. alginolyticus species. Out of the 49 isolates, 47 were positive for the collagenase gene. The ompK gene expression was observed in 46.9% (23/49) of the isolates as following: 91,3% of V. alginolyticus (n = 21) and 4,3% (n = 1) of V. parahameolyticus and S. putrefaciens, respectively. Seven isolates (14.3%) produced amplicons of the toxR gene, all characterized as V. alginolyticus. Phenotypic tests showed significant correlation with genotypic and proteomics results, in the identification of V. alginolyticus.
Keywords: Perna perna
Vibrio alginolyticus
genes de virulência
MALDI TOF MS
gens of virulence
???metadata.dc.subject.cnpq???: Medicina Veterinária
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: ALMEIDA, Greiciane França Bronzato de. Caracterização e perfil fenogenotípico de virulência de Vibrio alginolyticus associados aos mexilhões Perna perna (LINNAEUS, 1758) previamente isolados em diferentes pontos da costa do Rio de Janeiro. 2014. 47 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias). Instituto de Veterinária, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2013.
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/2930
Issue Date: 24-Feb-2014
Appears in Collections:MESTRADO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS

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