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???metadata.dc.type???: Tese
Title: Produção das proteínas recombinantes AM254, VirB9 e VirB10, de Anaplasma marginale e avaliação preliminar de sua antigenicidade.
Other Titles: Production of recombinant proteins AM254, VirB9 and VirB10 of Anaplasma marginale and preliminary evaluation its antigenicity.
???metadata.dc.creator???: Costa, Cátia Marques da 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Fonseca, Adivaldo Henrique da
First advisor-co: Araújo, Flábio Ribeiro de
???metadata.dc.description.resumo???: Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) é uma riquetsia intraeritrocítica, responsável por ocasionar grandes perdas econômicas na pecuária bovina das regiões tropical e sub-tropical. O objetivo desse trabalho foi produzir as proteínas de membrana recombinantes AM254, VirB9 e VirB10 e avaliar sua possível antigenicidade. Os genes am254, virB9 e virB10 foram submetidos a vários procedimentos experimentais até serem ligados ao plasmídeo pET-47b(+). Após a certificação do plasmídeo recombinante (pET-47bam254, pET-47b-virB9 e pET-47bvirB10) este foi transformado em E. coli Rosetta para expressão. As proteínas recombinantes produzidas foram analisadas pelo ensaio Western blot onde foi observada a reação do anticorpo monoclonal anti-histidina contra rVirB9 (31kDa), rVirB10 (60kDa) e rAM254 (47kDa). Após a confirmação da produção das proteínas recombinantes realizou-se a padronização do ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) indireto com soros oriundos de sangue total previamente confirmados por PCR; os mesmos soros também foram testados por ELISA (rMSP1 e rMSP5). As médias das densidades ópticas (DO) dos soros positivos foram de 1,339; 1,288 e 1,240 e dos soros negativos de 0,470, 0,324 e 0,414 para AM254, VirB9 e VirB10 respectivamente com diferença significativa ao nível de 5% entre positivos e negativos para cada proteína recombinante. O estudo demonstrou que as proteínas rAM 254, rVirB9 e rVirB10 de A. marginale são reconhecidas por soros de bovinos imunizados com diferentes isolados brasileiros da riquétsia (homólogo e heterólogos), revelando o potencial antigênico dessas proteínas.
Abstract: Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) is a ricketsial hemoparasite responsible for causing great economic losses in cattle from tropical and subtropical regions. The objectives of this work were to produce the recombinant membrane proteins AM254, VirB9 and VirB10 and to evaluate its possible antigenicity. The genes am254, virB9 and virB10 were submitted to various experiments and were , linked to pET47 (b) plasmid. After the certification of the recombinant plasmid (pET-47-am254, pET-47-virB9 and pET-47- virB10), it was transformed into E. coli Rosetta cells for expression. The recombinant proteins produced, were analyzed by Western blot assay where the reaction of the anti-histidin monoclonal antibody against rAM254 (47kDa), rVirB9 (31kDa) and rVirB10 (60kDa) was observed. After the confirmation of the production of recombinant proteins the indirect Enzyme-Linked Immnunosorbent Assay (ELISA) was standardized with sera previously confirmed by PCR and ELISA (rMSP1 and rMSP5). The averages of the optic densities (OD) of the positive sera were of 1.339; 1.288 and 1.240 and of the negative sera of 0.470, 0.324 and 0.414 for AM254, VirB9 and VirB10 respectively with significant difference to the level of 5% between positives and negatives for each recombinant protein. The study demonstrated that the proteins rAM 254, rVirB9 and rVirB10 of A. marginale are recognized by sera of bovines immunized by different Brazilian isolates of the ricketsia (homologous and heterologous), showing the antigenicity potential of these proteins.
Keywords: Anaplasmataceae
proteínas recombinantes de membrana
diagnóstico.
recombinant membrane protein
diagnostic.
???metadata.dc.subject.cnpq???: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Parasitologia Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: COSTA, Cátia Marques da. Production of recombinant proteins AM254, VirB9 and VirB10 of Anaplasma marginale and preliminary evaluation its antigenicity.. 2007. 73 f. Tese (Doutorado em Parasitologia Veterinária) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, 2007.
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/tede/816
Issue Date: 28-Feb-2007
Appears in Collections:DOUTORADO EM MEDICINA VETERINÁRIA (PATOLOGIA E CIÊNCIAS CLÍNICAS)

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