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???metadata.dc.type???: Tese
Title: Agentes da Piroplasmose equina: variabilidade genética de Theileria equi e Babesia caballi em equinos naturalmente infectados do estado do Rio de Janeiro e a dinâmica da infecção de Theileria equi em Rhipicephalus (Boophilus) microplus
Other Titles: Equine Piroplasmosis: genetic diversity of Theileria equi and Babesia caballi of naturally infected horses from the state of Rio de Janeiro and the dynamics of Theileria equi infection in Rhipicephalus (Boophilus) microplus
???metadata.dc.creator???: PEIXOTO, Maristela Peckle 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Massard, Carlos Luiz
First advisor-co: Santos, Huarrisson Azevedo
Second Advisor-co: Pires, Marcus Sandes
???metadata.dc.contributor.referee1???: Massard, Carlos Luiz
???metadata.dc.contributor.referee2???: Leite, Romário Cerqueira
???metadata.dc.contributor.referee3???: Labruna, Marcelo Bahia
???metadata.dc.contributor.referee4???: Dias, Roberto Júnio Pedroso
???metadata.dc.contributor.referee5???: Santos, Tiago Marques dos
???metadata.dc.description.resumo???: Os objetivos deste trabalho foram caracterizar molecularmente Theileria equi e Babesia caballi de amostras de equinos do Rio de Janeiro, bem como realizar um estudo da dinâmica da infecção de T. equi em Rhipicephalus (Boophilus) microplus. No primeiro capítulo realizou-se a caracterização molecular de um fragmento do gene rap-1 de B. caballi e a análise do grau de heterogeneidade do gene 18S rDNA em T. equi em amostras de equinos naturalmente infectados, do estado do Rio de janeiro. Foram obtidas vinte sequências do gene 18S rDNA de T. equi. As análises filogenéticas foram realizadas baseadas no ARB-Silva. Para a caracterização molecular de um fragmento do gene rap-1 de B. caballi foram utilizadas amostras positivas por cELISA e qPCR. Uma nested PCR foi desenvolvida para amplificar um fragmento do gene rap-1, e uma PCR convencional, para o gene completo. As sequências de aminoácidos e nucleotídeos sequenciados foram submetidas ao método Maximum-Likelihood. Na análise das sequências do 18S rDNA de T. equi, doze diferentes isolados foram observados em equinos no estado do Rio de Janeiro, sendo agrupados em dois dos três clados formados (I, II). As sequências de T. equi se agrupam dentro de um clado diferente dos demais Theilerídeos. Uma das 23 sequências de aminoácidos do gene rap-1 apresentou doze pontos de mutação. Na análise de agrupamentos, as amostras brasileiras agruparam no clado A, sendo estas analisadas como aminoácidos (152 aas) ou nucleotídeos (1244 pb). No segundo capítulo foram avaliados aspectos da dinâmica da infecção de T. equi em R. (B.) microplus alimentados em equino cronicamente infectado. Larvas de uma colônia livre de hemoparasitos foram utilizadas. Carrapatos e sangue do equino foram coletados de dois em dois dias. Os carrapatos foram dissecados e armazenados inteiros em “pools” de acordo com o dia pós-infestação, estágio evolutivo e gênero. Amostras de glândula salivar e ovário foram armazenados para Microscopia Eletrônica de Transmissão. As amostras foram testadas pela qPCR. Com relação aos carrapatos inteiros, mais de 90% das amostras foram positivas para T. equi. A carga parasitária média das amostras de carrapatos inteiros e glândulas salivares apresentaram aumento gradual com o avançar do período de alimentação. Das 45 amostras de glândula salivar, 77,78% foram positivas para T. equi e tiveram maior taxa de infecção no final do período experimental. Foi possível observar positividade em carrapatos recém emergidos, ninfas e adultos, indicando a ocorrência de transmissão transestadial. A positividade de amostras de ovários foi de 84,38%. A maior permanência de machos sobre o equino, associado à alta positividade deste tipo de amostra indicam que o macho pode ter participação significativa na transmissão. Visualizaram-se estruturas morfologicamente compatíveis com um piroplasma através de micrografia de transmissão em ovários e glândulas salivares de em R. (B.) microplus. A análise do gene 18S rDNA de T. equi e do gene rap-1 de B. caballi de amostras brasileiras demonstrou que diferentes isolados coexistem na mesma área. Experimentalmente, observou-se que R. (B.) microplus é capaz de se infectar com T. equi e que as formas multiplicam-se nas glândulas salivares e, possivelmente, em ovários.
Abstract: This study aimed to perform the molecular characterization of the B. caballi rap-1 gene and to analyze the degree of heterogeneity of the T. equi 18S rDNA gene of naturally infected horses in the state of Rio de Janeiro. Complete sequences of the T. equi 18S rDNA gene (n = 20) were obtained. The PCR products were cloned and sequenced. Phylogenetic analyzes were performed on ARB-Silva basis. For the molecular characterization of a fragment of the B. caballi rap-1 gene, 32 cELISA and qPCR positive equine samples were used. A nested PCR was developed to amplify a fragment of the rap-1 gene and a conventional PCR, aiming the amplification of the complete gene. The products were sequenced. Sequences were submitted to the Maximum-Likelihood reconstruction method with Poisson model and 1000 replicates. In the analysis of T. equi, twelve different isolates were observed in equines from the state of Rio de Janeiro and were grouped into two of the three clades formed (I, II), most of them grouped in clade I (70%, n = 14/20). The sequences of T. equi are grouped within a clade different from other Theilerids. It was possible to amplify a fragment of the B. caballi rap-1 gene from 23 sequences using nested PCR, identified as single sequences. One of the sequences showed twelve mutation points. In cluster analysis, the Brazilian samples belonged to clade A, being analyzed as amino acids (152a) or nucleotides (1244 bp). The aim of the second chapter was to evaluate the dinamic of infection of T. equi in R. (B.) microplus fed in chronically infected horses. The larvae obtained from a hemoparasite-free colony were used in the infestation of an equine chronically infected by T. equi. Ticks and the horse blood were collected every two days. Ticks were dissected and stored in pools according to the pos-infestation day, evolutionary stage and gender. Some of these specimens were stored entire. Salivary gland and ovary samples were stored properly for Transmission Electron Microscopy. Some stages, prior to ecdysis, were stored in B.O.D. to molt. Samples were tested by qPCR. Regarding to entire tick samples, more than 90% of the samples were positive for T. equi. The mean of parasite load in entire ticks and salivary glands presented gradual increasing with the progress of the feeding period. Of the 45 salivary gland samples, 77.78% were positive for T. equi and had a higher infection rate at the end of the experimental period. It was found freshly molted ticks positives for T. equi by qPCR, indicating transestadial transmission. 84,38% of R. (B.) microplus ovary samples were considered positives for T. equi by molecular tools. Males of R. (B.) microplus were found parasiting the equine for 60 days. This fact associated with the high positivity for T. equi indicates males as an epidemiologically important gender. Transmission micrographs revealed morphologic structures compatible with a Piroplasmid in the acini of salivary glands and ovaries. The phylogenetic analysis of the T. equi 18S rDNA gene and of B. caballi rap-1 gene showed that different isolates co-exist in the same area in Rio de Janeiro, Brazil. Experimently, it was possible to observe that R. (B.) microplus could be infected with T. equi and that the forms of development of this parasite are capable of multiply inside salivary glands and, possibly, ovaries.
Keywords: Diversidade genética
piroplasmose equina
theileriose equina
transmissão transestadial
transmissão transovariana
Genetic diversity
equine piroplasmosis
equine teileriosis
transestadial transmission
transovarian transmission
???metadata.dc.subject.cnpq???: Ciências Agrárias
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: PEIXOTO, Maristela Peckle. Agentes da Piroplasmose equina: variabilidade genética de Theileria equi e Babesia caballi em equinos naturalmente infectados do estado do Rio de Janeiro e a dinâmica da infecção de Theileria equi em Rhipicephalus (Boophilus) microplus. 2017. 133 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias). Instituto de Veterinária, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017.
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/2587
Issue Date: 22-Feb-2017
Appears in Collections:DOUTORADO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS

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