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???metadata.dc.type???: Dissertação
Title: Cultivo de Borrelia burgdorferi (Spirochaetales: Spirochaetaceae) em células embrionárias de Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae).
Other Titles: Culture of Borrelia burgdorferi (Spirochaetales: Spirochaetaceae) in embryonic cells of Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae).
???metadata.dc.creator???: Câmara, Teixeira, Rafaella 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Fonseca, Adivaldo Henrique da
???metadata.dc.contributor.referee1???: Ribeiro, Múcio Flávio Barbosa
???metadata.dc.contributor.referee2???: Oliveira, Angela de
???metadata.dc.contributor.referee3???: Massard, Carlos Luiz Massard
???metadata.dc.description.resumo???: As culturas celulares oferecem um simplificado sistema de observação que pode ser particularmente útil para estudos de microrganismos intracelulares e epicelulares. O objetivo deste estudo foi estabelecer cultura primária in vitro de células embrionárias do carrapato Rhipicephalus sanguineus para cultivo da espiroqueta Borrelia burgdorferi, cepa americana G39/40. A cultura foi estabelecida a partir de ovos embrionados de fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus com 12 dias após o ínicio da postura, utilizando o meio de cultivo Leibovitz´s L- 15B, suplementado com 20% de soro fetal bovino inativado, 10% de caldo triptose fosfato, 0,1% fração V de albumina bovina, 1% de glutamina e 0,1% de antibiótico gentamicina, pH 6,8. Com a formação de uma monocamada celular, o meio de cultura inicial L-15B foi retirado dos tubos e trocado por meio Barbour-Stoenner-Kelly (BSK) ou BSK com L-15B sem antibiótico. As espiroquetas previamente cultivadas em BSK foram contadas e inoculadas nos tubos, apresentando concentração final de aproximadamente 6,2 x 105 espiroquetas/mL. A contagem de B. burgdorferi dos tubos inoculados foi realizada quando o meio apresentou coloração amarela, indicativa de elevada acidez devido à multiplicação das espiroquetas. No terceiro dia após o início da cultura primária de células embrionárias de R. sanguineus, foi possível observar a fixação de agregados celulares na superfície dos frascos. A partir destes agregados, surgiram diversos tipos celulares, como grandes células fibroblastóides e estruturas semelhantes a vesículas e tubos. Na segunda semana, foi observado o aparecimento das células epitelióides ou redondas e, com 21 dias de cultivo, visualizou-se a formação de uma monocamada celular devido ao aspecto confluente das células. O meio de cultivo L-15B demonstrou ser eficiente para o desenvolvimento da cultura primária de células embrionárias de R. sanguineus. Houve grande multiplicação das espiroquetas cultivadas com células embrionárias quando comparada à concentração inicial, assim como das espiroquetas cultivadas na ausência das células de carrapato, observando-se um aumento em 100 vezes do número de B. burgdorferi. Sete dias após a inoculação, foram recuperadas maiores concentrações de B. burgdorferi nos tubos onde se utilizou somente o meio BSK, do que nos tubos onde foi utilizado BSK juntamente com Leibovitz´s L-15B. Independente dos meios de cultivo testados, a concentração final de B. burgdorferi dos tubos com células embrionárias de carrapato foi menor do que a dos tubos sem células embrionárias. Na observação dos tubos de cultivo à microscopia de contraste de fase, as espiroquetas apresentaram-se aderidas às células de carrapato epitelióides e fibroblastóides de maneira epicelular e com grande motilidade. As células embrionárias de R. sanguineus cultivadas em meio BSK, com ou sem inóculo de B. burgdorferi, pararam sua multiplicação, apresentaram degeneração na membrana e muitas desprenderam-se da superfície do frasco. As células cultivadas em meio BSK e L-15B continuaram a se multiplicar, muitas ainda estavam íntegras e aderidas ao frasco, com presença de tecidos em desenvolvimento, com menos células degeneradas e flutuantes que as cultivadas somente em BSK. A espiroqueta B. burgdorferi, cepa G39/40, aderiu, cresceu, multiplicou e apresentou grande motilidade nos cultivos com células embrionárias do carrapato R. sanguineus, utilizando meios BSK e Leibovitz´s L-15B.
Abstract: Cell cultures provide a simplified system of observation that can be particularly useful for studies of intracellular and epicellular microorganisms. The aim of this study was to establish in vitro embryonic cells primary culture of the tick Rhipicephalus sanguineus to cultivate the spirochete Borrelia burgdorferi american strain G39/40. The culture was established from embryonated eggs of engorged females of R. sanguineus to 12 days after the beginning of the oviposition, using the culture medium Leibovitz's L-15B supplemented with 20% of inactivated fetal calf serum, 10% of tryptose phosphate broth, 0.1% fraction V bovine albumin, 1% of glutamine and 0.1% of gentamicin antibiotic, pH 6.8. After the formation of a monolayer, the initial culture medium L-15B was removed from the tubes and replaced by Barbour-Stoenner-Kelly medium (BSK) or BSK with L-15B without antibiotics. Spirochetes previously grown in BSK were counted and inoculated into tubes, with final concentration of approximately 6.2 x 105 spirochetes/mL. B. burgdorferi from the inoculated tubes were countered when the means showed yellow color, indicative of high acidity due to the multiplication of spirochetes. On the third day after the start of primary culture of R. sanguineus embryonic cells, we observed the fixation of cell aggregates on the surface of the bottles. From these clusters, there were several cell types, such as large fibroblast-type cells and structures like vesicles and tubes. In the second week, we observed the appearance of round or flattened epithelial-type cells, and after 21 days of culture, we realized the formation of a monolayer due to the appearance of confluent cells. The L-15B medium proved to be efficient for the development of primary culture of R. sanguineus embryonic cells. There was a great multiplication of spirochetes cultivated with cultured embryonic cells when compared to the initial concentration, as well as the spirochetes grown in the absence of the tick cells, observing an increase of 100 times the number of B. burgdorferi. Seven days after inoculation, the tubes in which we used only the BSK medium, higher concentrations of B. burgdorferi were recovered when compared to the tubes where the medium BSK and Leibovitz's L-15B were used. Regardless of the culture media tested, the final concentration of B. burgdorferi of the tubes with embryonic tick cells was lower than that of seamless embryonic cells. In observation of the culture tubes on microscopy phase contrast, spirochetes were presented adhered to epithelial-type and fibroblast-type tick cells in an epicelular way and with great motility. R. sanguineus embryonic cells grown in BSK medium, with or without B. burgdorferi inoculation, stopped its propagation, showed membrane degeneration and many of them broke away from the surface of the bottle. The cells grown in BSK and L- 15B continued to multiply, many were still intact and attached to the bottle, with the presence of tissues in development, with fewer degenerated and floating cells than those cultivated in BSK. The spirochete B. burgdorferi strain G39/40, adhered, grew, multiplied and showed great motility in cultures of embryonic cells of R. sanguineus tick, using BSK and Leibovitz´s L-15B media.
Keywords: Tick
cell culture
Borrelia burgdorferi
Carrapato
cultivo celular
Borrelia burgdorferi
???metadata.dc.subject.cnpq???: Ciências Agrárias
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária (Patologia e Ciências Clínicas)
Citation: Câmara, Teixeira, Rafaella. Cultivo de Borrelia burgdorferi (Spirochaetales: Spirochaetaceae) em células embrionárias de Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae).. 2010. [40 f.]. Dissertação( PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA (PATOLOGIA E CIÊNCIAS CLÍNICAS)) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, [Seropédica - RJ] .
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/1896
Issue Date: 25-Feb-2010
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