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???metadata.dc.type???: Tese
Title: Caracterização genotípica de Borrelia sp e de genes de Anaplasma marginale que codificam proteínas de membrana com potencial imunogênico.
Other Titles: Genetic caracterization of Borrelia sp and membrane protein genes of Anaplasma marginale with imunogenic potential.
???metadata.dc.creator???: Daniel da Silva, Guedes Junior 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Fonseca, Adivaldo Henrique da
First advisor-co: Araújo, Flábio Ribeiro de
???metadata.dc.contributor.referee1???: Fragoso, Stenio Perdigão
???metadata.dc.contributor.referee2???: Massard, Carlos Luiz
???metadata.dc.contributor.referee3???: Botteon, Paulo de Tarso Landgarff
???metadata.dc.contributor.referee4???: Barreiras, Jairo Dias
???metadata.dc.description.resumo???: A distribuição geográfica da borreliose bovina é determinada pela dispersão do seu vetor. Borrelia theileri é a espécie predominante em bovinos, sendo que B. burgdorferi e B. coriaceae também foram relatadas causando doença clínica. Portanto, B. theileri causa doença leve em bovinos, e ainda é importante pelo seu potencial em ser confundido com a espiroqueta da Doença de Lyme, B. burgdorferi, e com agentes do Aborto Epizoótico bovino, B. coriaceae. No Brasil, assim como em outros países Sul americanos, o agente desta enfermidade ainda não foi isolado prejudicando ainda mais o diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi à identificação genotípica da espécie de Borrelia sp que acomete bovinos no Brasil. Foram utilizados para extração de DNA, o sangue e carrapatos de bovinos com sorologia positiva ao ELISA indireto com antígeno bruto para Borrelia burgdorferi. Foram desenhados oligonucleotídeos iniciadores para genes dos grupos Borrelia burgdorferi e B. theileri: 16S, flaA, flaB, groel, hbb, recA, 5s-23s, p66, rrs, rpob e glpq. Após a reação de PCR, somente os oligonucleotídeos iniciadores rrs e rpob amplificaram seqüências. A seqüência preditiva de aminoácidos de RRS3 revelou homologia de 99% com B. hermsii e B. duttonii e a seqüência preditiva de aminoácidos de RPOB demonstrou 67% de homologia com B. duttonii e B. recurrentis. Isto sugere que a espécie de Borrelia presente no Brasil não seja pertencente ao grupo de B. burgdorferi. Pouco se sabe sobre a variabilidade genética dos genes que codificam proteínas de membrana de isolados brasileiros de A. marginale. O produto destes genes constitui uma ferramenta importante, pois pode haver polimorfismo antigênico, que pode prejudicar a proteção cruzada entre os isolados e as chances de identificação de candidatos a imunógenos. O objetivo do presente estudo foi determinar o grau de conservação das seqüências destes genes em um isolado brasileiro de A. marginale frente aos isolados Saint Maries, Florida e A. marginale centrale. Para tanto, oligonucleotídeos foram desenhados para amplificar os genes omp1, omp4, omp5, omp7, omp8, omp10, omp14, omp15, sodb, opag1, opag3, virb3, am097 (VirB9- 1), am956 (PepA), am254 (ef-tu), am854 por PCR. Os genes foram então seqüenciados pelo método de Sanger e as seqüências preditas de aminoácidos alinhadas e a homologia analisada através do programa CLUSTAL W. Com exceção de OMP 7 todas as demais (OMP1, OMP4, OMP5, OMP8, OMP10, OMP14, OMP15, SODB, OPAG1, OPAG3, VIRB3, VIRB9-1, PepA, EF-Tu, AM854) apresentaram níveis de homologia de 92 a 100% entre os isolados de A. marginale. Destas, apenas OMP1, OMP5, EF-Tu, VirB3, SODB, VIRB9-1 e AM854 apresentaram homologia superior a 72% em relação a A. marginale centrale, o qual confere proteção cruzada contra A. marginale.
Abstract: The geographic distribution of bovine borreliosis is determined by the dispersion of its vector. Borrelia theileri is the predominant species in cattle, and B. coriaceae and B. burgdorferi also been reported causing clinical disease. B. theileri cause mild disease in cattle, and still is important for its potential to be confused with the spirochete of Lyme disease, B. burgdorferi, and agents of epizootic bovine abortion, B. coriaceae. In Brazil, as well as in other South American countries, the agent of this disease has not been isolated further confusing the diagnosis. The objective of this study was to identify genotypically Borrelia sp that affects cattle in Brazil. DNA extraction, was performed from blood and ticks of cattle with positive serology by indirect ELISA with crude antigen of Borrelia burgdorferi. Primers were designed for genes of Borrelia burgdorferi and B. theileri groups: 16S, flaA, flaB, GroEL, hbb, recA, 5s-23s, p66, rrs, rpoB and glpq. After the PCR reaction, only the primers amplified rrs and rpoB sequences. The predictive amino acid sequence of RRS3 revealed 99% homology with B. hermsii and B. duttonii and predictive amino acid sequence of RPOB showed 67% homology with B. duttonii and B. recurrentis. This suggests that the species of Borrelia sp present in Brazil is not owned by group B. burgdorferi. Little is known regarding the genetic variability of genes that encode membrane proteins of Brazilian isolates of A. marginale. The products of these genes constitute an important tool, as there may be significant antigen polymorphism, which may damage cross-protection between isolates and the chances of identifying candidate immunogens. The aim of the present study was to determine the degree of conservation of sequences of these genes in a Brazilian isolate of A. marginale comparing with Saint Maries and Florida isolates. For this, primers were designed to amplify the genes omp1, omp4, omp5, omp7, omp8, omp10, omp14, omp15, sodb, opag1, opag3, virb3, am097 (VirB9-1), am956 (PepA), am254 (ef-tu), am854 by PCR. The genes were then sequenced by Sanger method and the predicted amino acid sequences aligned and homology analyzed by the program CLUSTAL W. With the exception of OMP 7 all proteins (OMP1, OMP4, OMP5, OMP8, OMP10, OMP14, OMP15, SODB, OPAG1, OPAG3, VIRB3, VIRB9-1, PepA, EF-Tu, AM854) exhibited homology greater than 92% with other A. marginale isolates. However, only OMP1, OMP5, EF-Tu, VirB3, SODB, VIRB9-1 e AM854 showed homology greater than 72% regarding to A. marginale centrale which confers cross-protection against A. marginale.
Keywords: A. marginale
proteínas de membrana
Borrelia sp
???metadata.dc.subject.cnpq???: Ciências Agrárias
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: Daniel da Silva, Guedes Junior. Caracterização genotípica de Borrelia sp e de genes de Anaplasma marginale que codificam proteínas de membrana com potencial imunogênico.. 2010. [104 f.]. Tese( PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, [Seropédica- Rio de Janeiro] .
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/1860
Issue Date: 10-Feb-2010
Appears in Collections:MESTRADO EM MEDICINA VETERINÁRIA (PATOLOGIA E CIÊNCIAS CLÍNICAS)

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