@PHDTHESIS{ 2021:1494689120,
 	title = {Caracteriza??o de transportadores envolvidos na remobiliza??o de nitrato armazenado no vac?olo em arroz},
 	year = {2021},
 	url = "https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/6475",
 	abstract = "O ac?mulo de nitrato (NO3-) nos vac?olos celulares ? uma estrat?gia de extrema import?ncia para suprir o nitrog?nio (N) necess?rio ao desenvolvimento da planta devido as varia??es de disponibilidade no solo. O transporte desse ?on pelo tonoplasto ? mediado por prote?nas transportadoras espec?ficas, ainda pouco conhecidas. A identifica??o dessas prote?nas permite esclarecer o processo de ac?mulo e remobiliza??o de NO3- e delinear estrat?gias visando aumentar a efici?ncia do uso de N. O objetivo deste trabalho foi a identifica??o de genes que codificam prote?nas transportadoras respons?veis pela remobiliza??o do NO3- acumulado no vac?olo em arroz. Inicialmente sequ?ncias de amino?cidos potencialmente codificantes de prote?nas de transporte de NO3- expressas no vac?olo foram reunidas e realizada uma an?lise filogen?tica. Em seguida avaliou-se a resposta de express?o destas prote?nas frente ao flush de NO3- em um experimento com plantas de arroz (var. Manteiga) em solu??o nutritiva de Hoagland com 5 mM de N-NO3- por 30 dias, sob um per?odo de supress?o de N por 72 horas, seguido do ressuprimento do fornecimento de N. Posteriormente, os genes OsNPF7.8 e OsNPF5.13 foram clonados inseridos em vetor de superexpress?o e realizou-se a transforma??o gen?tica de plantas de arroz (var. Nipponbare) via A. tumefaciens. Dois experimentos foram realizados semelhantes ao inicial com modifica??o no tempo de cultivo e nas coletas: as linhagens OsNPF7.8 foram cultivadas em dose constante por 20 dias e submetidas a 72h de supress?o seguido pelo ressuprimento do fornecimento de NO3- realizando coletas ap?s a supress?o e 24h ap?s o ressuprimento. As linhagens OsNPF5.13 foram cultivadas em dose constante por 24 dias e submetidas a supress?o de N realizando coletas 24 e 96 h ap?s a supress?o. Um total de 71 genes foram utilizados na cria??o da ?rvore filogen?tica que evidenciou a diferencia??o entre as sequ?ncias codificantes de canais de cloreto (CLC), transportadores de alta afinidade (NRT2) e de baixa afinidade (NPF) com a separa??o de 8 grupos. Dentre os transportadores de baixa afinidade o grupo III reuniu genes da fam?lia NPF5 caracterizadas como atuantes no efluxo de NO3- a partir do vac?olo em A. thaliana, e o grupo IV genes NPF7 com genes caracterizados como atuantes no influxo de NO3- para o vac?olo em arroz. A an?lise de express?o demonstrou que os genes OsNPF5.12, OsNPF5.13, OsNPF5.15, OsNPF5.16sp1 e OsNF5.17 apresentaram indu??o de transcri??o em resposta a supress?o do fornecimento de NO3- na solu??o associado ao aumento dos teores de NO3- na planta e da atividade da enzima nitrato redutase (NR), indicando rela??o com o efluxo de nitrato a partir do vac?olo. Por outro lado, o gene OsNPF7.8 apresentou maior resposta ao per?odo de ressuprimento relacionando-o ao influxo do ?on. A superexpress?o do gene OsNPF5.13 resultou em maior atividade da NR, aumento dos teores de am?nio, N-amino e a?ucares sol?veis demonstrando um aumento da estabilidade da assimila??o de N. Enquanto as linhagens superexpressando o gene OsNPF7.8 apresentaram aumento dos teores de NO3- na raiz e da atividade da NR, al?m de aumento dos teores de am?nio e N-amino nas folhas, demonstrando altera??es no influxo de NO3- nas ra?zes.",
 	publisher = {Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Fitotecnia},
 	note = {Instituto de Agronomia}
}