@MASTERSTHESIS{ 2018:2037529085, title = {Estudo morfo-fisiol?gico de hem?citos de f?meas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus infectadas por Metarhizium spp. marcado com GFP}, year = {2018}, url = "https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/4776", abstract = "Metarhizium spp. ? um fungo amplamente utilizado no controle biol?gico de artr?podes. Os hem?citos, as c?lulas presentes no hemolinfa, est?o envolvidos na resposta imune destes ectoparasitas, principalmente quando desafiados por pat?genos. A obten??o dessas c?lulas ? dificultosa e muito pouco se conhece sobre a morfologia dos hem?citos de Rhipicephalus microplus e sua resposta ?s infec??es. O presente estudo teve como objetivos o estabelescimento de um melhor protocolo para a obten??o de hem?citos de f?meas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus e a an?lise morfol?gica dessas c?lulas em condi??es fisiol?gicas e quando infectadas por fungos artropodopatog?nicos marcados ou n?o com GFP. Foram testados diferentes velocidades de centrifuga??o da hemolinfa, e o m?todo com maior viabilidade celular e alta concentra??o de c?lulas foi aplicado ap?s a inocula??o f?ngica em f?meas ingurgitadas de R. microplus. Ap?s a exposi??o por imers?o, os par?metros das f?mea ingurgitadas avaliados foram o peso da massa de ovos, ?ndice de produ??o de ovos, per?odo de incuba??o das larvas, ?ndice nutricional e o percentual de controle. Posteriormente, a coleta de hemolinfa foi realizada e os hem?citos foram separados do plasma, ressuspensos em PBS e quantificados na c?mara de Neubauer. Al?m da quantifica??o, os hem?citos foram submetidos ?s colora??es de hematoxilina e eosina e PAS, al?m de serem submetidos ? microscopia eletr?nica de transmiss?o. Para a padroniza??o, a centrifuga??o em 500 ? g durante tr?s min a 4 ? C foi considerada mais eficiente, e foi aplicada ap?s inocula??o de fungos. Posteriormente, no bioensaio por imers?o, os resultados dos dois isolados f?ngicos foram muito parecidos entre si, demonstrando que a marca??o molecular n?o influenciou na virul?ncia dos fungos. No entanto, para a quantifica??o de hem?citos, a inocula??o foi utilizada e todos os isolados foram capazes de diminuir a concentra??o em aproximadamente 80% em compara??o com a quantidade de hem?citos de f?meas n?o infectadas. Em condi??es fisiol?gicas foram identificados cinco tipos de hem?citos (pr?-hem?citos, granul?citos, esferul?citos, plasmat?citos e oenocit?ides) e quando as f?meas foram infectadas com Metarhizium, estas c?lulas apresentavam em processo de morte celular e algumas c?lulas tamb?m possuiam a internaliza??o do fungo em quest?o, sugerindo a presen?a de um processo de fagocitose. Desta forma, sugere-se que a infec??o por fungos entomopatog?nicos pode gerar altera??es nos hem?citos de R. microplus e influenciar diretamente na concentra??o dessas c?lulas. Este trabalho foi o primeiro a realizar microscopia eletr?nica de transmiss?o em hem?citos desta esp?cie de carrapato e foi o primeiro a descrever altera??es celulares decorrentes de infec??o f?ngica atrav?s de microscopia eletr?nica de transmiss?o.", publisher = {Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Veterin?rias}, note = {Instituto de Veterin?ria} }