@PHDTHESIS{ 2009:918757104, title = {Sistemas modelos de forma??o de lignina utilizando recursos sint?ticos e celulares de Eucalyptus grandis (Hill ex Maiden)}, year = {2009}, url = "https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/tede/489", abstract = "O objetivo principal desse trabalho foi a elabora??o de modelos para o estudo da lignifica??o. Mudas de Eucalyptus grandis, obtidas a partir da germina??o de sementes in vitro, foram desenvolvidas visando ? obten??o de explantes de segmentos caulinares. Para tal, foram testadas as auxinas TDZ, 2,4-D, ANA e AIA. N?o foi constatada a forma??o de calos nos tratamentos contendo 50,0 ?M de 2,4-D; 3,0 ?M de TDZ e na aus?ncia de regulador de crescimento. Ap?s 210 dias, foi selecionado um calo formado no tratamento contendo 2,5 ?M de TDZ. Este calo foi cultivado no mesmo tratamento, por?m, em meio l?quido e sob agita??o por 60 dias a 25 ?C no escuro, para indu??o da forma??o de lignina da parede celular e ligninas extracelulares. Ap?s este per?odo, as c?lulas em suspens?o foram submetidas aos seguintes tratamentos: meio MS suplementado com sacarose, 2,4-D + cinetina, ?cido p-cum?rico e sem suplemento extra. As c?lulas permaneceram nestes tratamentos por 30 dias. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com 4 repeti??es, sendo a parcela experimental constitu?da por um Erlenmeyer contendo 125 ml de cultura de c?lulas em suspens?o. Para extra??o e determina??o da lignina da parede celular, foi utilizada a t?cnica baseada na lignina tioglicolato. A concentra??o de lignina da parede das c?lulas e das ligninas extracelulares foi avaliada em UV. Para verificar a normalidade dos dados foi usado o teste Lilliefors. Os dados foram submetidos ? an?lise de vari?ncia e as m?dias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A maior concentra??o de lignina na parede celular (371.4200 ppm) foi verificada no tratamento EG1pc 0,0584 ?M de sacarose. Ligninas extracelulares tamb?m foram analisadas com o reagente Wiesner, RMN H e RMN13C. A maior concentra??o (134.3167 ppm) de ligninas extracelulares foi constatada no tratamento EG3e (100?M ?cido p-cum?rico). Por?m, os resultados de RMN H e RMN13C, n?o permitiram caracterizar a polimeriza??o de lignina extracelular pura. No estudo da lignifica??o utilizou-se a t?cnica de polimeriza??o desidrogenativa (DHP) in vitro. DHPs foram elaborados em meios obtidos a partir de filtrados das culturas de c?lulas em suspens?o em diferentes tratamentos. Para cada tratamento, foi adicionado H2O2, peroxidase ou H2O2 + peroxidase. A produ??o de DHPs foi efetuada em meio MS (sem o pr?vio cultivo de c?lulas) como substrato no qual tr?s solu??es (?lcool conifer?lico ou sinap?lico, peroxidase e o H2O2) foram adicionadas por gotejamento. Os produtos das DHPs, juntamente com os filtrados, foram analisados por IV e RMN H. Nos tratamentos realizados em meio MS sem o pr?vio cultivo de c?lulas em suspens?o, os DHPs produzidos foram analisados por RMN H e RMN13C. Os espectros de IV n?o apresentaram sinal na regi?o de 1500 cm-1, bem como as an?lises em RMN H mostraram que n?o houve forma??o de DHPs. Por?m, nas suspens?es celulares tanto em RMN H quanto RMN13C apresentaram sinais de DHP, exceto no tratamento com DHP1c (MS + 0,0584 ?M sacarose). As an?lises em RMN H apresentaram: 3.86; 6.92 e 4.71 ppm e de RMN13C: 134,26; 88,21; 65,17; 55,90 e 20,75 ppm.", publisher = {Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Ambientais e Florestais}, note = {Instituto de Florestas} }