@MASTERSTHESIS{ 2011:21169787, title = {Produ??o, concentra??o e caracteriza??o parcial de extrato celulol?tico produzido por linhagem f?ngica mutante}, year = {2011}, url = "https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/1152", abstract = "A produ??o de enzimas para uso em diferentes ?reas da agroind?stria de alimentos mostra perspectivas futuras promissoras, devido ?s v?rias caracter?sticas inerentes ? a??o das enzimas que s?o compostos naturais, biodegrad?veis e capazes de desempenhar rea??es espec?ficas com melhor qualidade. Entre as enzimas mais utilizadas pelo setor de alimentos est?o as celulases, um complexo de enzimas que atuam de forma sin?rgica sobre a hidr?lise das liga??es glicos?dicas ?-1,4 das mol?culas de celulose, e possuem v?rias aplica??es industriais neste setor, como na extra??o de ?leos vegetais, na macera??o de frutas e na clarifica??o de sucos. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo produzir, concentrar e caracterizar parcialmente um extrato celulol?tico obtido por linhagem f?ngica mutante de Aspergillus niger. A produ??o foi realizada por fermenta??o no estado s?lido (FES) em colunas aeradas, utilizando como substrato farelo de trigo triturado umidificado com solu??o de (NH4)2SO4 em HCl 0,1N e celobiose, como indutor. O extrato celulol?tico consistiu de uma mistura de extratos obtidos em 3 ensaios fermentativos diferentes, selecionados em trabalhos anteriores como as melhores condi??es para produ??o de cada uma das enzimascarboximetilcelulase (CMCase), ?-glicosidase e celulase em papel de filtro (FPase). Durante a caracteriza??o do extrato enzim?tico, al?m da atividade das celulases, tamb?m era avaliado o teor de prote?na, a presen?a de protease e de enzimas correlatas ? a??o de celulases como xilanase e poligalacturonase. Para concentra??o do extrato enzim?tico foram realizadas tr?s diferentes estrat?gias: ultrafiltra??o em um sistema de quadro e placas em a?o inox, utilizando uma membrana de polietersulfona com massa molar de corte de 20 kDa e ?rea de 0,014m2; precipita??o com sulfato de am?nio utilizando satura??es de 20%, 40%, 50%, 60%, 80% e liofiliza??o. O processo de ultrafiltra??o foi o que obteve o melhor resultado, purificando parcialmente a amostra e proporcionando uma recupera??o das atividades enzim?ticas entre 75% e 99% para todas as atividades avaliadas, exceto FPase. A an?lise eletrofor?tica em SDS-PAGE demonstrou a presen?a de 15 bandas vis?veis de prote?nas no extrato celulol?tico com pesos moleculares que compreendem uma faixa entre 13,3 e 104,6 kD. O teste de zimografia foi realizado para as celulases e enzimas correlatas, bem como para protease, no entanto somente para esta ?ltima, as condi??es testadas foram adequadas tornando-se poss?vel identificar bandas em 88, 103 e 145 kDa. A efetiva a??o das enzimas ?-glicosidase e xilanase na hidr?lise de celobiose e xilana, respectivamente,foi comprovada em cromatografia de camada fina. Al?m disso, a temperatura e pH ?timos de atua??o de carboximetilcelulase e ?-glicosidase foram determinados utilizando o delineamento composto central rotacional 22, com 4 pontos centrais. A an?lise dos resultados de ambas as enzimas demonstrou que as vari?veis eram significativas, a um n?vel de confian?a de 95%. Com base nas condi??es estudadas, concluiu-se que as faixas de pH e temperatura ?timos para a atua??o eficiente e conjunta de CMCase e ?-glicosidase est?o entre 3,7 a 5,5 e 60 a 65 ?C, respectivamente.", publisher = {Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncia e Tecnologia de Alimentos}, note = {Instituto de Tecnologia} }