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???metadata.dc.type???: Tese
Title: Caracterização de receptores Toll-like relacionados à resposta imune no carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus
???metadata.dc.creator???: REZENDE, Sabrina Rita da Fonseca 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Bittencourt, Vânia Rita Elias Pinheiro
???metadata.dc.contributor.advisor2???: Leite, Milane de Souza
???metadata.dc.contributor.referee1???: Leite, Milane de Souza
???metadata.dc.contributor.referee2???: Paes, Márcia Cristina
???metadata.dc.contributor.referee3???: Silva, Jairo Pinheiro da
???metadata.dc.contributor.referee4???: Genta, Fernando Ariel
???metadata.dc.contributor.referee5???: Oliveira, Carlos Jorge Logullo de
???metadata.dc.description.resumo???: Os receptores Toll-like (TLR) são proteínas transmembranares altamente conservadas que desempenham papel importante no reconhecimento de patógenos. Este estudo visa identificar a possível presença e expressão diferencial de receptores Toll-like em tecidos e células importantes para a resposta imune inata do carrapato R. (B.) microplus. Para tal, identificamos genes de R. (B.) microplus que codificam homólogos de receptores Toll, denominados RmToll-like e RmToll8-like. Detectamos a presença desses receptores nos principais órgãos envolvidos na resposta imune, corpo gorduroso, hemócitos, glândula salivar e célula digestiva. A expressão gênica dos receptores Toll-like, avaliada por qPCR, mostrou modulação nos diferentes tecidos analisados, e confirmamos a expressão desses receptores pelas técnicas de Western Blot e microscopia confocal. Como o corpo gorduroso representa um importante órgão de defesa imune e apresentou uma maior modulação dos receptores estudados nós optamos por investigar mais profundamente esses receptores neste tecido. No corpo gorduroso, esses receptores foram encontrados especificamente nos trofócitos arredondados, em suas membranas celulares e vesículas intracelulares. A expressão gênica dos receptores Toll-like foi avaliada por qPCR 6, 24 e 48 horas após os desafios com o fungo entomopátogenico Beauveria bassiana. A transcrição de RmToll-like foi modulada positivamente 48 horas após o desafio com B. bassiana, mas não observamos modulação do gene RmToll8-like nos diferentes tratamentos e em função dos tempos de exposição ao fungo. Entretanto, ao avaliarmos a expressão das proteínas desses receptores dos carrapatos desafiados com o fungo, não observamos diferença entre os tratamentos e nos tempos analisados. Quando investigamos uma cepa menos virulenta do fungo observamos que RmToll-like foi modulada positivamente nos tempos de 24h e 48h, sendo esta modulação menor quando comparada com a modulação pela cepa mais virulenta. Em relação ao RmToll8-like não observamos diferença entre os tratamentos e nos tempos analisados. A expressão dos genes de peptideos antimicrobianos também foi modulada pelo desafio com fungo, contudo indicando uma possível imunosupressão, mas investigações futuras com novos tempos de desafio devem ser consideradas. Avaliando o efeitos de uma molécula padrão de superfície de patógenos, o zimosan, observamos um aumento significativo na expressão do RmToll-like, mas não em relação ao RmToll8-like. Avaliamos a expressão das proteínas dos receptores em carrapatos desafiados com zimosan, não observamos diferença entre os tratamentos e nos tempos analisados. O presente trabalho mostra pela primeira vez a presença de receptores Toll-like em carrapatos, e relata a expressão diferencial entre diferentes tecidos engajados na resposta imune inata e modulação por desafios imunológicos neste artrópode.
Abstract: Toll-like receptors (TLR) are highly conserved transmembrane proteins that play important roles in pathogen recognition. This study aims to identify the presence and differential expression of Toll-like receptors in tissues and cells that are important to the innate immune response of the tick R. (B.) microplus. For this, we identified genes of R. (B.) microplus encoding Toll receptors homologues, which we called RmToll-like and RmToll8-like. We detected the presence of these receptors in organs involved in immune response, such as fat body, hemocytes, salivary glands and digestive cells. Gene expression of Toll-like receptors was evaluated by qPCR and differential expression in the different tissues analyzed. We confirmed the expression of these receptors by western blot and confocal microscopy. Fat body had the greatest modulation of receptors studied, we have chosen to further investigate these receptors in this tissue. In fat body, these receptors were found specifically in round-shaped trophocytes cell membranes and intracellular vesicles. Gene expression of Toll-like receptors was assessed by qPCR 6, 24 and 48 hours after the challenges with the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana. Transcription of RmToll-like was positively modulated 48 hours after challenge with B. bassiana, but we did not observe modulation of gene RmToll8-like in the various treatments depending on the time of exposure to the fungi. However, when we evaluated the protein expression of these receptors in ticks challenged with the fungi, no significant difference between treatments and the times analyzed was observed. When we investigated a less virulent strain of fungi we observed that RmToll-like expression was positively modulated after 24h and 48h of infection, this modulation being smaller when compared with those from the more virulent strain. Regarding RmToll8-like we not observed differences between treatments and the times analyzed. The gene expression of antimicrobial peptides was also modulated by the challenge with the fungi, though indicating a possible immunosuppression, but further investigations with new times of challenge should be considered. Evaluating the effects of a pathogen-associated molecular patterns, zymosan, we observed a significant increase in expression of RmToll-like, but not for RmToll8-like. We also evaluated the expression of the corresponding proteins in ticks challenged with zymosan, but no significant difference between treatments and the times analyzed was observed. This study shows for the first time the presence of Toll-like receptors in ticks, and reports the differential expression between different tissues engaged in the innate immune response modulation and immune challenges in this arthropod.
Keywords: Receptores Toll-Like
imunidade inata
Rhipicephalus (Boophilus) microplus
Beauveria bassiana
???metadata.dc.subject.cnpq???: Medicina Veterinária
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: REZENDE, Sabrina Rita da Fonseca. Caracterização de receptores Toll-like relacionados à resposta imune no carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus. 2013. 110 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias, Parasitologia Veterinária). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ. 2013.
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/2771
Issue Date: 27-Mar-2013
Appears in Collections:DOUTORADO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS

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