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???metadata.dc.type???: Tese
Title: Avaliação dos Perfis Protéico e Lipídico na Resposta de Rhipicephalus Microplus à Infecção com Fungos.
Other Titles: Evaluation of protein and lipid profile in response of Rhipicephalus microplus to infection by fungi.
???metadata.dc.creator???: Angelo, Isabele da Costa 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Bittencourt, Vânia Rita Elias Pinheiro
???metadata.dc.contributor.advisor2???: Chagas, Evelize Folly das
First advisor-co: Chagas, Evelize Folly das
???metadata.dc.contributor.referee1???: Fernandes, Everton Kort Kamp
???metadata.dc.contributor.referee2???: Atella, Georgia Correa
???metadata.dc.contributor.referee3???: Silva, Márcia Regina Soares da
???metadata.dc.contributor.referee4???: Oliveira, Pedro Lagerblad de
???metadata.dc.description.resumo???: O trabalho avaliou os perfis protéico e lipídico de fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus após infecção com Metarhizium anisopliae s.l., Beauveria bassiana ou Fusarium oxysporum. Os tratamentos foram imersão ou inoculação da suspensão conidial em R. microplus. A hemolinfa foi coletada 24 e 48 horas após os tratamentos. O plasma foi separado dos hemócitos por centrifugação e os hemócitos resuspensos em tampão fosfato pH 7,2. A concentração de proteína total foi determinada em ambas as frações da hemolinfa e os hemócitos quantificados. O plasma da hemolinfa foi filtrado em membrana de 100 kDa e 10 kDa, sendo analisados por eletroforese e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O proteoma do plasma da hemolinfa (tratamento por inoculação) foi avaliado por gel 2D. Foram observadas variações na quantidade de proteína total de ambas as frações da hemolinfa, na quantidade de hemócitos bem como na intensidade de proteínas/peptídeos expressos no plasma da hemolinfa. Nos hemócitos, os entomopatógenos reduziram a quantidade de serpinas, enquanto F. oxysporum causou aumento. No gel 2D foram observadas variações na expressão bem como na ausência/presença de proteínas entre os grupos. O plasma da hemolinfa teve sua atividade antimicrobiana testada contra Escherichia coli e Staphylococcus aureus e contra o fungo utilizado no tratamento das fêmeas ingurgitadas. A hemolinfa coletada 48 horas após o tratamento por imersão com B. bassiana apresentou atividade anti-B. bassiana com 48 horas de avaliação. Esta hemolinfa foi submetida à coluna Superose de CLAE e o pico coletado analisado na coluna analítica C18. As frações coletadas da C18 apresentaram atividade anti-B. bassiana, porém não apresentaram atividade contra Candida albicans. Essas frações foram analisadas por Maldi-Tof e a maioria delas apresentou um íon com razão m/z 1.119,5; no entanto, outros íons podem estar envolvidos com essa atividade antimicrobiana. Os lipídeos presentes no plasma da hemolinfa, nos hemócitos e no corpo gorduroso foram extraídos e analisados por cromatografia em camada delgada (CCD) ou CCD de alta performance para lipídeos neutros e fosfolipídeos. As classes de lipídeos neutros encontradas no plasma da hemolinfa foram colesterol-éster, colesterol (CHO) e ácidos graxos (AG), que sofreram alterações em função do fungo utilizado, tipo de tratamento e tempo de observação. Os fosfolipídeos encontrados foram fosfatidilcolina e fosfatidiletanolamina, que não foram significativamente alterados após a infecção fúngica. Nos hemócitos, as mesmas classes de lipídeos foram encontradas e B. bassiana alterou os fosfolipídeos, enquanto M. anisopliae s.l. alterou os AG e CHO. O corpo gorduroso apresentou, além destas classes de lipídeos neutros, o triacilglicerol, que aumentou significativamente 48 horas após a inoculação com M. anisopliae s.l. A atividade lipase no corpo gorduroso foi mensurada, sendo evidenciado um aumento 48 horas após a inoculação, principalmente no grupo inoculado com Metarhizium. Portanto, os resultados demonstraram alterações na expressão de proteínas no plasma da hemolinfa e nos hemócitos após inoculação com os fungos, imunossupressão dos hemócitos, indução de peptídeos com atividade antimicrobiana após infecção com B. bassiana, além de alterações no perfil lipídico de R. microplus após infecção. No entanto, maiores estudos são necessários para o entendimento dessas alterações.
Abstract: The study evaluated the protein and lipid profiles of Rhipicephalus microplus engorged females after infection by Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana and Fusarium oxysporum. The treatments were immersion or inoculation of conidial suspension in R. microplus. The hemolymph was collected 24 and 48 hours after treatment. The cell-free hemolymph was separated of hemocytes by centrifugation and hemocytes resuspended in phosphate buffer pH 7.2. The amount of total protein was determined in both fractions of hemolymph and hemocytes were quantified. The cell-free hemolymph was filtered through a 100 kDa and 10 kDa membranes, and analyzed by electrophoresis and liquid chromatography (HPLC). The proteome of cell-free hemolymph (treatment by injection) was evaluated by 2DPAGE. Changes were observed in amount total protein and the amount of hemocytes, but no difference was observed in the electrophoretic profile (1D-PAGE) of the cell-free hemolymph. In haemocytes, the entomopathogens reduced the amount of serpins, while F. oxysporum caused increased. In 2D-PAGE variations were observed in both expression and presence/absence of protein between the groups. The cell-free hemolymph antimicrobial activity was tested against Escherichia coli and Staphylococcus aureus and against the fungus used in the treatment of engorged ticks. The hemolymph collected 48 hours after the immersion treatment with B. bassiana apresented activity anti-B. bassiana with 48 hours of evaluation. This hemolymph was subjected to Superose column to HPLC and peak was collected and analyzed on the analytical column C18. The fractions were collected from the C18 and its apresented activity anti-B. bassiana, but showed no activity against Candida albicans. These fractions were analyzed by Maldi-Tof and most of them had in common an ion with m/z 1,119.5; however, other ions may be involved with this activity antimicrobial. The lipids present in cell-free hemolymph, in the hemocyte and fat body were extracted and analyzed by thin layer chromatography (TLC) or HPTLC for neutral lipids and phospholipids. The classes of neutral lipids in the cell-free hemolymph were cholesterol ester, cholesterol (CHO) and fatty acids (FA), which have varied depending on the fungus used, type of treatment and observation time. Phospholipids found were phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine, its were not significantly altered after the fungal infection. In hemocytes, the same classes of lipids were found and B. bassiana modified phospholipids, while M. anisopliae s.l. altered FA and CHO. The fat body showed, in addition to these classes of neutral lipids, the triglycerides, which increased significantly 48 hours after inoculation with M. anisopliae s.l. The lipase activity in fat body was measured and it was demonstrated that increased activity 48 hours after inoculation, mainly in the group inoculated with Metarhizium. Therefore, the results showed alterations related to the proteins expression in the hemocytes and the cell-free hemolymph after inoculation with fungi, immunosuppression of hemocytes and antimicrobial peptides induction after infection with B. bassiana, besides changes in the lipid profile of R. microplus after infection. However, further studies are necessary to understand these changes.
Keywords: Peptídeos antimicrobianos; Controle biológico; metabolismo lipídico
???metadata.dc.subject.cnpq???: Ciências Agrárias
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
???metadata.dc.publisher.initials???: UFRRJ
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Veterinária
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: Angelo, Isabele da Costa. Avaliação dos Perfis Protéico e Lipídico na Resposta de Rhipicephalus Microplus à Infecção com Fungos.. 2011. [143 folhas]. Tese( PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ADMINISTRAÇÃO) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, [Seropédica/RJ] .
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/1073
Issue Date: 3-Mar-2011
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DOUTORADO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS

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